Optimización de la técnica por PCR en tiempo real (RT-PCR) para la detección el virus del síndrome de las manchas blancas (WSSV, White Spot Syndrome Virus)
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Date
2016
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Instituto Nacional de Investigación y Desarrollo Pesquero (INIDEP)
Abstract
El Síndrome las Manchas Blancas (WSSV) es causado por un virus que puede infectar gran variedad de crustáceos acuáticos, capaz de producir infecciones generalizadas y mortandad masiva en ejemplares de cultivo. De acuerdo con las normas de la OIE (2011) se ha indicado que el WSSV es una enfermedad que en caso de ocurrir, obligatoriamente debe ser declarada. Actualmente, para el diagnóstico de WSSV, la PCR en tiempo real (RT-PCR) está suplantando a los métodos moleculares tradicionales de detección de patógenos por diferentes variantes de PCR, ya que es más rápido, específico y sensible. El objetivo de éste trabajo fue la optimización de la técnica de RT-PCR para la detección de WSSV mediante la utilización de sondas de hidrólisis, basándose en el protocolo aceptado por la OIE en el 2012. Se construyó un plásmido recombinante para utilizar como control positivo y se optimizó el ensayo utilizando sondas TaqMan. La adecuada combinación de las concentraciones finales de sonda y cebadores logró que las variaciones en el ensayo no causen efectos importantes en el resultado, y que el nivel basal de fluorescencia sea mínimo, economizando reactivos. La técnica demostró ser mas sensible que los métodos convencionales, y el límite de detección de la misma fue entre 1 y 10 copias del virus;
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Citation
Salomone, A.L. (2016). Optimización de la técnica por PCR en tiempo real (RT-PCR) para la detección el virus del síndrome de las manchas blancas (WSSV, White Spot Syndrome Virus) (Informe de Investigación, No. 84). Instituto Nacional de Investigación y Desarrollo Pesquero (INIDEP)