Optimización de PCR en tiempo real para la detección de Vibrio cholerae
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Date
2015
Authors
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Publisher
Instituto Nacional de Investigación y Desarrollo Pesquero (INIDEP)
Abstract
El cólera es causado por el bacilo Gram negativo Vibrio cholerae, un habitante autóctono de los ecosistemas acuáticos. Los brotes de cólera siguen un patrón estacional, indicando un posible rol de factores ambientales en la aparición de las epidemias. En este trabajo se ha optimizado un método de diagnóstico molecular basado en PCR en tiempo real (RT-PCR o Q-PCR) aplicable a la detección de V. cholerae en muestras de agua y de cultivos, ya que el método por PCR a punto final presenta baja sensibilidad en muestras de agua. La RT-PCR es una técnica mucho más sensible que la PCR a punto final, ya que utiliza fluoróforos como moléculas reporteras, con lo cual se consigue una amplificación en la señal emitida. Se utilizó el mismo juego de cebadores utilizados en la PCR a punto final y SYBR Green® Master Mix, ambos disponibles en el laboratorio. Se logró que las variaciones en el ensayo no causen efectos importantes en los resultados, y que el nivel basal de fluorescencia sea mínimo. La técnica demostró ser más sensible que la PCR a punto final, permitiendo detectar un mínimo de 20 pg de ADN, de ésta manera muestras de agua positivas por cultivo, pero negativas por PCR a punto final, lograron identificarse finalmente como positivas
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Citation
Salomone, A.L. (2015). Optimización de PCR en tiempo real para la detección de Vibrio cholerae (Informe de Investigación, No. 51). Instituto Nacional de Investigación y Desarrollo Pesquero (INIDEP)